全自動蛋白轉(zhuǎn)膜儀是一種用于將蛋白質(zhì)從聚丙烯酰胺凝膠高效轉(zhuǎn)移到膜（如PVDF膜或硝酸纖維素膜）上的實驗儀器，廣泛應(yīng)用于Western Blot等分子生物學(xué)實驗中。相較傳統(tǒng)的半干式或濕轉(zhuǎn)方式，全自動蛋白轉(zhuǎn)膜儀操作更簡便，轉(zhuǎn)印速度更快，尤其適用于高通量實驗場景。那么，如何正確使用全自動蛋白轉(zhuǎn)膜儀？以下為標(biāo)準(zhǔn)操作流程及關(guān)鍵注意事項。

一、準(zhǔn)備工作

樣品電泳：首先完成SDS-PAGE電泳步驟，分離目標(biāo)蛋白。

預(yù)處理膜和凝膠：如使用PVDF膜，需先在甲醇中浸泡1分鐘活化，再轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)印緩沖液中；凝膠則需用轉(zhuǎn)印緩沖液充分平衡，通常需浸泡5–10分鐘。

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)印緩沖液：可使用設(shè)備配套的高效快速轉(zhuǎn)膜緩沖液母液稀釋配制，按推薦比例配制所需體積。

二、組裝轉(zhuǎn)印夾層（轉(zhuǎn)印“夾心”）

轉(zhuǎn)印“夾心”結(jié)構(gòu)從陽極到陰極一般為：

陽極板 → 濾紙 → 膜 → 凝膠 → 濾紙 → 陰極板。

操作時需確保膜與凝膠之間貼合緊密、無氣泡，可使用玻璃棒或移液槍輕壓排氣。

三、設(shè)置轉(zhuǎn)印條件

開機操作：開啟全自動蛋白轉(zhuǎn)膜儀，進入主界面。

程序設(shè)定：可通過7寸液晶觸摸屏輸入轉(zhuǎn)印參數(shù)，如電壓、時間及電流強度等。常見參考參數(shù)為：

分子量 ≤ 70 kDa：25V，7分鐘

分子量 ≤ 100 kDa：25V，10分鐘

分子量 ≤ 180 kDa：25V，15分鐘

程序調(diào)用：儀器支持最多保存25組自定義運行程序，用戶可直接調(diào)用已有設(shè)置，避免重復(fù)操作。

四、啟動轉(zhuǎn)印并監(jiān)控過程

啟動設(shè)備后，系統(tǒng)將自動控制電流并執(zhí)行設(shè)定的轉(zhuǎn)印程序。運行過程中，屏幕會實時顯示轉(zhuǎn)印狀態(tài)，包括電壓、電流和剩余時間等，便于實驗者監(jiān)控。

五、取出膜并后續(xù)處理

轉(zhuǎn)印完成后，打開轉(zhuǎn)印模塊，取出膜。此時蛋白已由凝膠成功轉(zhuǎn)移至膜表面，可繼續(xù)進行封閉、抗體孵育、顯色或化學(xué)發(fā)光等后續(xù)步驟。

六、注意事項

確保膜與凝膠大小一致，并準(zhǔn)確對齊。

所有耗材（濾紙、膜）需充分浸潤在緩沖液中，避免干燥引起轉(zhuǎn)印不完全。

轉(zhuǎn)印前檢查設(shè)備接觸良好，避免電極連接異常導(dǎo)致效率下降。

不建議超過推薦時間，以免小分子蛋白穿膜或背景增高。

結(jié)語

全自動蛋白轉(zhuǎn)膜儀通過集成式設(shè)計和自動化控制，簡化了蛋白轉(zhuǎn)印流程。只需按步驟完成準(zhǔn)備、設(shè)定和運行，便可在短時間內(nèi)獲得高質(zhì)量轉(zhuǎn)印結(jié)果，是現(xiàn)代分子實驗室提高效率、保障數(shù)據(jù)一致性的理想選擇。